ارزیابی مقاومت آنتی بیوتیکی به آمیکاسین با استفاده از روش های Multiplex PCRو Real-Time PCR

مقدمه و هدف: مقاومت دارویی در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس یک تهدید بزرگ برای سلامت عمومی است. معمولاً با استفاده از روش نسبت آگار به عنوان بیش از 1% کلنی های مقاوم به دارو تعریف می شود. تشخیص تعداد کمی از سل مقاوم به دارو در یک جمعیت، که به عنوان مقاومت ناهمگون نیز شناخته می شود، با روش های فعلی چالش برانگیز است. هدف از این مطالعه ارزیابی مقاومت آنتی بیوتیکی به آمیکاسین با استفاده از روش های Multiplex PCRو Real-Time PCR می باشد. مواد و روش کار: ما TaqMan-MGB را برای شناسایی توالی های نوع وحشی و جهش یافته ژن rrs و ژن هایی که با مقاومت به آمیکاسین مرتبط هستند را طراحی کردیم. ما در این مطالعه مخلوط‌های مقاوم از سل حساس و بسیار مقاوم به دارو را انتخاب نمودیم و به دنبال آن استخراج DNA و Multiplex PCR و Real-Time PCR انجام شد. همچنین در این مطالعه ما عملکرد دو آزمایش Multiplex PCR و Real-Time PCR را که برای تشخیص جهش‌های مقاومت دارویی مرتبط با آمیکاسین طراحی شده‌اند، ارزیابی کردیم. نتایج: نتایج مطالعه نشان داد که در واقع، روش Multiplex PCR قادر به شناسایی توالی جهش یافته در مواردی بود که حاوی حداقل 1000∶1 Tb حساس: مقاوم بودند. در مقابل، Real-time PCR حساسیت کمتری داشتند و وضوح کمی برای تشخیص مقاومت ناهمگون داشتند، و برای تشخیص مقاومت به نسبت‌های کاملاً 1∶1 یا 10∶ 1 حساس: مقاوم نیاز داشتند. تا زمانی که مقادیر کافی سل (بیش از 1000 cfu/ml) وجود داشته باشد، آزمایش ما می تواند در خلط نیز کاربرد داشته باشد. این روش های مولکلوی 61.8 درصد از ایزوله های M. tuberculosis مقاوم به چند دارو و 64.7 درصد از جدایه M. tuberculosis به شدت مقاوم به دارو را به درستی شناسایی می کنند، همچنین این روش ها می توانند MTC مقاوم به دارو را در 3 ساعت به درستی تشخیص دهند.